Orizol是一种即用型RNA抽提试剂,适用于动植物细胞、组织及细菌的RNA抽提。该试剂可在迅速裂解细胞或组织的同时灭活细胞释放出的核酸酶,保持 RNA 的完整性,提取的RNA无DNA与蛋白污染,可直接用于qPCR、Northern blot、dot blot、cDNA克隆、体外翻译等。
4℃避光保存
a. Orizol RNA Extraction Reagent(A)与T品牌RNA提取试剂(B)提取多种组织与细胞的RNA电泳效果图对比。
b. Orizol RNA Extraction Reagent(A)与T品牌RNA提取试剂(B)提取A549细胞的RNA电泳图。
1. 需自备氯仿,异丙醇,70 %乙醇(DEPC水配制)和DEPC水。
2. 所有离心管,枪头及相关溶液都必须无RNase污染,耐高温器物可150 ºC烘烤4 h以去除RNase,其它器物可用0.01 %的DEPC水浸泡过夜,灭菌后烘干。
3. 操作过程中建议戴一次性口罩,勤换手套,以防RNase污染。
4. 避免接触皮肤或吸入,如不慎接触,请立即用大量去垢剂和清水冲洗,如仍有不适,请及时就医。
5. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。
Q1:RNA发生降解
a. 确保提取RNA的试剂和器具没有被RNase污染。
b. 戴口罩和一次性手套,并在洁净区操作。
c. 针对内源RNase含量高或不易匀浆的组织,可将组织切成小块后立即投入液氮冷冻后进行研磨,整个研磨过程中,样品不得融化。
OriNote:RNA也可能在电泳过程中发生降解,推荐使用Oriscience配套的RNA专用上样缓冲液(NC201-1ml)及电泳缓冲液(NC301-100ml)以避免此问题。
Q2:样品中杂质较多
a. 对于某些蛋白,多糖或脂肪含量较高的细胞或组织,Orizol裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物,可12,000 rpm,4ºC离心15 min,吸取上清至新的离心管中,加入氯仿混匀后进行下一步操作。
Q3: 提取的RNA有基因组污染
a. 由于氯仿在常温下与水有微小的互溶性,需确保于低温下(2 ~ 8℃)高速离心。
b. 吸取含RNA的上层无色水相时,应避免吸到中间层和下层液体。