Oriscience Fast Endo-Free Plasmid Mini Extraction Kit 是一种用于小量 (1-5ml) 无内毒素质粒快速抽提的离心柱式试剂盒。采用先进的内毒素吸附缓冲液 (Binding Solution),能有效去除质粒中的内毒素污染,纯化的质粒中内毒素含量远小于 0.1EU/μg,可大大提高转染实验效率和动物注射效果。本试剂盒无需使用有毒的苯酚,氯仿等试剂,无需乙醇沉淀,操作时间短,可在 30-60min 之内完成。 提取提取的质粒内毒素含量极低且纯净度高,可直接用于转染、酶切、PCR、转化、测序等各种实验。
RNase,-20℃保存;
其他组分,室温(15-25℃)保存。
A.通过重组 C 因子内毒素检测试剂盒获取标曲,根据标准曲线计算出本产品所提取的质粒内毒素含量低于0.1EU/µg。
B. 使用本产品提取的pcDNA3.1-EGFP 质粒转染至293T细胞, 转染48 h后 EGFP 荧光效果。
1. 首次使用前请短暂离心RNase A,按试剂瓶标签提示将RNase加入Solution I 中,于2-8℃保存。
2. 首次使用Wash Buffer II前按试剂瓶标签提示加入异丙醇,于室温保存。
3. 首次使用Wash Buffer III前按试剂瓶标签提示加入无水乙醇,于室温保存。
4. 温度较低时,Solution II 可能会有沉淀产生,如有沉淀,37℃水浴加热溶解混匀后使用。
5. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。
Q1. 低产量或无 DNA
a. 培养的细菌没有转化相应的质粒 DNA 或细菌培养条件不正确。挑选确定含有转化质粒 DNA 的细菌进行培养,并确认细菌培养条件。
b. 细菌保存时间过长。细菌在甘油冻存液中保存时间较长,常会出现质粒丢失的现象,可以重新划平板,挑取含质粒的单菌落或重新转化。
c. Solution II 出现沉淀。置于 37℃溶解,混匀后再使用。
d. Wash Buffer II或Wash Buffer III没有添加异丙醇或无水乙醇。确认是否添加正确体积的异丙醇或无水乙醇。
Q2. 质粒 DNA 污染
a. 加入Solution II 后剧烈震荡导致基因组DNA降解。加入Solution II 后轻柔混匀,不可剧烈震荡或使用涡旋仪。
b. 裂解时间过长。Solution II 加入后立即混匀,裂解时间不要超过5 min。