Oriscience Cell/Tissue Total RNA Extraction Kit是一种即用快速型RNA抽提试剂盒,适用于动植物细胞、组织的RNA抽提。该产品相比于传统RNA提取试剂,柱式法RNA提取试剂盒具有快速、高效(完整性好,纯度、浓度高)、操作简便(全过程可在常温操作)、无需使用β-巯基乙醇和酚/氯仿等有毒有害试剂的特点,能在迅速裂解组织或细胞的同时抑制细胞释放出的核酸酶,保持RNA的完整性。试剂盒中DNA-Cleaning Column能够有效的吸附去除基因组DNA,RNA-Only Column能高效地结合RNA,提取的RNA无DNA与蛋白污染,可直接用于qPCR、Northern blot、dot blot、cDNA克隆、体外翻译等。
室温(15-25℃)保存。
1. 所有离心管,枪头及相关溶液都必须无RNase污染,耐高温器物可150 ºC烘烤4 h以去除RNase,其它器物可用0.01 %的DEPC水浸泡过夜,灭菌后烘干。
2. 操作前在Lysis Buffe中加入β-巯基乙醇至终浓度为1% (如每1 ml Lysis Buffe中加入10 μl β-巯基乙醇),此裂解液建议现配现用。Lysis Buffe加入β-巯基乙醇后可在4℃保存1个月。
3. 试剂盒使用前,请在Binding Buffer、Wash Buffer I、Wash Buffer II中添加无水乙醇,加入量请参照试剂瓶上标签。
4. 请检查试剂盒中的 Lysis Buffer和 Wash Buffe I是否有晶体析出现象,若低温存放后有晶体析出,可将 Buffer 放置于室温或 37℃一段时间,将晶体溶解后混匀再使用。
5. 样品处理量控制在10-20 mg组织或1-5 × 106 个细胞,样品量过多会导致基因组DNA残留或产量降低,并可能会导致DNA-Cleaning Column柱堵塞。
6. 操作过程中建议戴一次性口罩,勤换手套,以防RNase污染。
7. 避免接触皮肤或吸入,如不慎接触,请立即用大量去垢剂和清水冲洗,如仍有不适,请及时就医。
8. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。
Q1:RNA发生降解
a. 确保提取RNA的试剂和器具没有被RNase污染。
b. 戴口罩和一次性手套,并在洁净区操作。
c. 针对内源RNase含量高或不易匀浆的组织,可将组织切成小块后立即投入液氮冷冻后进行研磨,整个研磨过程中,样品不得融化。
Q2: DNA-Cleaning Column发生堵塞
a. 减少样本的投入量。
b. 组织研磨或者匀浆不充分, 将裂解后的液体先进行12,000 rpm室温离心5 min,取上清转移至DNA-Cleaning Column,继续后续操作。
Q3: 提取不到RNA 或RNA产量低
a. DNA-Cleaning Column发生堵塞,导致 RNA 的质量下降。
b. 匀浆或者液氮研磨不充分。
c. 洗脱不充分。可加入大于50 μl 65℃预热的RNase-free water至膜中央,延长室温放置时间,离心后进行二次洗脱。