2×Oriscience Express Screening PCR Mix是一款基于定向进化改造的KOD DNA聚合酶开发快速筛选PCR Mix。本产品扩增效率高，对各类型PCR反应抑制剂的耐受程度高，扩增速度快(<1Kb, 1sec/Kb;1-10Kb, 3-10sec/Kb, >10kb, 10-15sec/Kb)，可大幅缩短PCR反应时间（大多数反应可在45分钟左右完成），大大提高高通量PCR筛选的效率。本产品是一种优化的即用型快速扩增预混液，含有电泳缓冲液和红色染料，只需加入引物和模板即可进行扩增，扩增产物为平末端，扩增后可直接电泳检测，提高了检测通量和结果的重现性。

储存条件

       -20℃保存

数据展示

图1. 使用2×Oriscience Express Screening PCR Mix (Dye Plus)扩增不同基因组DNA

注意事项

1. 使用本产品前，一定要完全融化，并上下颠倒轻轻混匀后才能使用，尽量避免起泡。

2. 实验过程中除了酶活性丧失外，下列因素也可能导致扩增失败：（1）模板太多或太少；（2）样品中存在 Mg²⁺络合剂，导致Mg²⁺实际浓度过低；（3）PCR仪温度不准；（4）临床来源的样品中含有未知的 Taq 酶抑制剂；（5）引物部分降解；（6）dNTP 部分降解；（7）反应体系配制错误。

3. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。

Q1：如果存在非特异性扩增条带，如何提高特异性？

a. 引物：检查人工合成的引物是否因储存条件不当导致降解，建议用新合成的引物尝试；引物的设计是否合理，可利用BLAST检查引物的特异性。

b. 模板：长时间的放置或反复冻融会引起降解，应该使用新鲜制备的DNA双链作为PCR模板；如果模板为cDNA时，需要测定所用RNA的纯度、完整度以及逆转录是所用引物。

c. 酶：PCR所使用的酶会因储存条件或运输不当导致失活，建议更换新的酶或用另一来源的酶重新开始实验。

Q2：如果没有得到扩增产物，排查时首先要考虑哪些参数？

a. 保证所有的 PCR 组分都包含在反应中。 并且应始终包括阳性对照，以确保每个组分都存在且功能正常。

b. 如果实验设计没有问题，则PCR 的循环数可适当增加（一次 3-5 个循环），最多 40 个循环。 增加循环数可以克服低丰度模板或由于引物中的杂质或引物的低启动效率而导致模板无法被扩增的问题。

c. 如果增加循环数不能改善结果，则 PCR 条件也许对特定引物或模板过于严格。 考虑修改 PCR 条件如下：（1）以 2℃为增量降低其退火温度。（2）增加延长的时间。（3）增加模板量，以确定最佳模板量。