2× Oriscience Fusion Master Mix (Dye Plus) (2 ×高保真酶预混液）是一款操作方便的2×即用型混合液，其含有 Fusion High-Fidelity DNA 聚合酶、dNTPs、反应缓冲液与稳定剂。使用时仅需加入DNA模板和引物，大大简化了操作步骤，提高了结果的重现性。本产品含有绿色染料，PCR产物无需添加上样缓冲液即可直接进行电泳。具有快速简便、高灵敏度、高特异性、高扩增效率等优点。Fusion High-Fidelity DNA 聚合酶具有5’ - 3’ DNA聚合酶活性和3’ - 5’ 核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。扩增速度可达30 sec/kb，扩增产物为平末端，可实现快速 PCR。  

储存条件

-20℃保存

产品特点与优势

快速简便---PCR产物无需添加上样缓冲液即可直接进行电泳

高保真度---保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍

高成功率---轻松扩出目的条带

Q1：如果存在非特异性扩增条带，如何提高特异性？

a. DNA模板：（1）DNA起始量过多。可适当降低DNA起始量，减少非特异性PCR产物产生。（2）DNA的降解。通过电泳检查模板完整性及浓度，必要时重新纯化模板。（3）模板具有复杂的序列（如，高GC含量或含二级结构）。调节退火温度和延长延伸时间来实现高效扩增。

b. 引物：（1）设计存在问题-特异性。使用在线引物设计工具，确保引物对目的片段具有特异性。（2）设计存在问题-引物二聚体。确保引物的3′末端不含互补序列或连续的G或C核苷酸，防止形成引物二聚体。（3）用量过多。引物浓度过高可能会加剧引物二聚体的形成。

c. 反应程序：（1）变性不充分。当扩增富含GC的模板和具有二级结构的序列时，可增加变性时间和/或温度，使DNA有效解离。（2）退火温度过低。如果出现比目的条带小的杂带，则需升高退火温度，提高特异性。（3）退火时间过长。如果出现比目的条带大的杂带，则需缩短退火时间，尽量减少引物与非特异性序列的结合。

Q2：扩增得率低或者无扩增条带，可能的原因是？

a. DNA模板：（1）DNA起始量过少。适当增加起始量。（2）DNA的降解。通过电泳检查模板完整性及浓度，必要时重新纯化模板。（3）模板具有复杂的序列（如，高GC含量或含二级结构）。调节退火温度和延长延伸时间来实现高效扩增。（4）DNA纯度低。存在抑制DNA聚合酶的物质，可使用70%乙醇洗涤DNA去除残留盐分等干扰物质。

b. 引物：（1）设计存在问题-特异性。使用在线引物设计工具，确保引物对目的片段具有特异性。（2）设计存在问题-引物二聚体。确保引物的3′末端不含互补序列或连续的G或C核苷酸，防止形成引物二聚体。（3）用量过少。引物用量范围通常为0.1–1 μM。（4）引物的降解。建议重新合成引物再进行扩增。

c. 反应程序：（1）变性不充分。当扩增富含GC的模板和具有二级结构的序列时，可增加变性时间或温度，使DNA有效解离。（2）退火温度不合适，可对退火温度设置梯度，从而摸索反应的最佳的退火温度。

d. 其他原因：（1）反应体系配制时出现错误。建议重复实验。（2）试剂还未完全融化或未上下颠倒就开始使用。建议待试剂完全融化，并上下颠倒轻轻混匀后再进行使用。