OriFect Transfection Reagent是一种高效的阳离子聚合物转染试剂。聚合物分支中带正电荷的基团可以与带负电荷的核酸相互作用,形成稳定的OriFect-核酸复合物,与细胞表面结合并通过非特异性内吞作用进入细胞。OriFect转染试剂与脂质体转染试剂相比具有以下优势:(1)达到相同转染效率时细胞毒性更低;(2)转染前无需更换培养基;(3)转染过程中无需使用Opti-MEM等特殊培养基,降低了实验成本;(4)转染操作简单,重复性好。
保存于4℃,不可冷冻
图A. OriFect与T公司L试剂用EGFP表达质粒分别转染293T。
图B. OriFect与T公司L试剂分别转染siRNA的Western-blot 结果。
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。
问题 |
分析 |
解决方法 |
转染效率偏低 |
细胞本身状态不佳 |
使用适度传代且为对数生长期的细胞 |
OriFect浓度太高,造成细胞毒性 |
降低OriFect的用量 |
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OriFect和DNA的比例未优化 |
预实验,确定OriFect和DNA的比例 |
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转染体系不对 |
设立阳性对照,如转染GFP基因,检验转染体系 |
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DNA质量低,有降解或含有内毒素 |
使用纯化后且OD260/280≥1.8的DNA |
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OriFect和OriFect enhancer未稀释 |
根据使用说明对转染试剂稀释后加入 |
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转染复合物中含有血清 |
使用无血清培养基 |
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支原体污染 |
定期检查细胞中是否有支原体污染 |
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转染后细胞状态差 |
转染试剂用量偏多,造成细胞毒性 |
减少转染试剂用量,更换为正常含血清培养基 |
转染时细胞汇合度偏低 |
使用对数生长期的细胞,转染时细胞汇合度达60%-80% |
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DNA未纯化,含有内毒素 |
使用纯化后且OD260/280≥1.8 的DNA |
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细胞株对转染试剂较敏感或转染后培养时间过长 |
加入转染复合物6-8 h后,及时更换培养基 |
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基因的产物毒性 |
验证基因产物是否有毒 |
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转染复合物加入培养基后分布不均,局部转染复合物浓度过高,细胞毒性偏高 |
加入转染复合物后,轻晃匀或轻用手指敲孔板一侧使其分布均匀 |
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细胞状态不佳。传代次数太少,细胞未恢复正常状态;或传代次数过多,细胞老化 |
使用适度传代的细胞,保证使用的细胞状态正常;减少代次差异对实验结果的影响 |