Oriscience High Sensitivity ECL Kit是一种高敏型ECL化学发光试剂盒。本产品可与二抗上偶联的辣根过氧化物酶 (horseradish peroxidase, HRP) 发生化学反应，发出荧光，从而可通过荧光成像设备或X光压片检测样品。Oriscience High Sensitivity ECL试剂盒采用了新型的发光底物体系，具有高灵敏度和高信噪比等特点，不含有毒成分，安全性更高。

储存条件

4℃避光保存

注意事项

1. 在配置ECL工作液过程中吸取A液和B液时应避免交叉污染。

2. ECL工作液应在每次使用前新鲜配制，避免室温放置时间过长。

3. 曝光时间过长或蛋白过量，将会导致过曝，使条带强弱变化失去线性关系；曝光不足则条带模糊。

4. ECL发光液是HRP的显色底物，因此检测对象必须由HRP标记。

5. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。

Q1：背景脏，信噪比低，出现非特异性条带

a. 抗体特异性低：选用特异性更高的抗体。

b. 显影时间过长：在确保获得足够强度的目标蛋白信号的前提下，缩短显影时间。

c. 抗体孵育和洗膜过程中的污染：确保操作过程中所有试剂和用具的洁净度。

d. 未进行非特异性封闭或封闭不充分：延长封闭时间，考虑更换合适的封闭剂。

e. 一抗浓度过高导致非特异性结合：稀释抗体至合适浓度，以更高稀释度抗体孵育更长时间（耗时长但特异性结合最好）。

f. 二抗与封闭剂非特异性结合：设置二抗对照(不加一抗)以明确，如确实存在此种情况，可在孵育和洗涤液中加入温和去污剂，如吐温20。

OriNote：脱脂奶粉含有酪蛋白，对于酪蛋白激酶，该蛋白本身就是一种磷酸化蛋白底物，有可能会结合磷酸化特异性抗体而易产生高背景。使用 BSA 代替奶粉作为封闭剂。

g. 膜干燥，导致高背景： 在孵育过程中防止膜变干，在任何步骤都保证膜有充分的反应液。

h. 未结合蛋白质洗涤不充分：增加洗涤次数。

Q2：目的条带过曝

a. 减少蛋白上样量。

b. 缩短曝光时间。

c. 用缓冲液适当洗涤后重新显影。

d. 滴加ECL后放置一段时间再显影。

Q3：目的条带弱

a. 转膜不充分：优化转膜条件，提高转膜效率。

b. 增加蛋白上样量。

c. 抗体稀释倍数过大：降低抗体稀释倍数以提高其浓度。

d. 抗体使用时间过长导致抗体失效：重新配制抗体。

Q4：背景有不均匀的白色斑点

a. 转膜时膜上有气泡或抗体在膜上分布不均：转膜过程中尽量去除气泡，抗体孵育时保持摇动。

Q5：背景有黑色斑点

a. 抗体结合了封闭剂：过滤封闭剂。